中药物质组成的解析是作用机理研究的前提和基础。清肺排毒汤由21味饮片组成，化学成分极其复杂，结构类型多样，包括生物碱类、黄酮类、皂苷类、三萜类、苯丙素类等，极性覆盖范围极大，物质组成研究具有极大的挑战。因此，多维度的表征技术对于清肺排毒汤中复杂成分的鉴定极其重要。

针对清肺排毒汤的复杂性，本研究开展了离线二维色谱串联质谱（offline two-dimensional chromatography, 2D HPLC×UPLC/Q-TOF）分离分析技术研究。针对清肺排毒汤反相色谱分离的一维组分F1-F9（图1），根据组分的极性差异性，分别选择不同的色谱分离模式和高正交性色谱材料，并进行流动相种类、添加剂及梯度的系统优化，构建了三种正交分离技术和方法分别进行强极性、中等极性和弱极性组分的分离。基于反相/亲水二维（C18ME/BEH Amide）的分离体系实现F1-F3的选择性分离，基于反相/极性反相二维（C18ME/BEH Shield RP18）的分离体系实现F4-F7的选择性分离，基于反相/反相二维（C18ME/PFP）的分离体系实现F8-F9的选择性分离，代表性谱图如图1-2。采用建立的分离方法串联高分辨质谱进行了深入表征，最终从9个组分发现了2755个化合物，成功鉴定了403个化合物（图3），其中包含大量的异构体，为作用机理的研究提供有效的物质组成信息。（文/图 熊乐乐）

图1 清肺排毒汤一维反相色谱分离（C18ME）

图2 清肺排毒汤F1-F9组分的二维分离

图3 清肺排毒汤F1-F9组分鉴定化合物的分子量分布，A）正离子模式，B）负离子模式